По-прежнему актуальной остается проблема ранней диагностики острого панкреатита, который опасен развитием тяжелых осложнений и высоким риском летального исхода.
Пусковым механизмом возникновения заболевания является деструкция наружных и внутренних мембран клеток поджелудочной железы, приводящая к высвобождению высокоактивных протеолитических (необходимых для усвоения белков), липолитических (расщепляющих жиры) и других ферментов, которые способны еще более усугубить разрушение ткани поджелудочной железы — вплоть до ее некротизации. В результате создаются благоприятные условия для присоединения к местному воспалительному процессу бактериальной инфекции, возникновения сепсиса, легочной и почечной (полиорганной) недостаточности.
Воспаление поджелудочной железы может развиться быстро, поставив под угрозу жизнь пациента: оно вызывает настолько значительные изменения в организме, что иногда врач с трудом успевает оказать помощь.
Правильный и своевременный диагноз имеет решающее значение, а это во многом зависит от методологии лабораторного исследования после поступления пациента в стационар.
«Деструктивный» фермент
Поскольку пусковым механизмом развития тяжелого патологического процесса при остром панкреатите является активация липолитических ферментов (фосфолипаз и липаз), особое значение имеют те из них, которые вносят наибольший вклад в развитие деструктивного процесса.
Значимая роль придается определению активности панкреатической фосфолипазы А2 (ФЛА2) — органоспецифичному ферменту поджелудочной железы, который оказывает прямое разрушающее влияние на мембраны клеток, вызывает самопереваривание клеток ткани поджелудочной железы (панкреонекроз).
По уровню активности панкреатического фермента поджелудочной железы можно не только осуществлять раннюю диагностику заболевания, но и дифференцировать отечную форму панкреатита от деструктивной, от чего во многом зависит выбор правильной тактики лечения.
Выполненные в БелМАПО исследования пациентов с различными формами панкреатита (отечной, деструктивной) показали значительное увеличение активности ФЛА2 в сыворотке крови лишь у пациентов с деструктивной формой панкреатита, в то время как при остром отечном и хроническом панкреатите активность фермента существенно не выходила за пределы интервала показателей нормы.
Кроме того, была установлена строгая корреляция между показателями смертности и активности этого фермента. Данные результаты свидетельствуют о том, что тест определения панкреатической фосфолипазы А2 является наиболее специфичным для диагностики деструктивных поражений ткани поджелудочной железы.
Что вызывает повышение активности ФЛА2?
Согласно результатам исследований последних лет, основным фактором, вызывающим повышение активности ФЛА2, является стимуляция свободнорадикального окисления липидов вследствие снижения антиокислительной защиты мембраны клеток, которая осуществляется через посредство антиоксидантов.
В случае уменьшения их содержания в мембране значительно возрастает вероятность образования свободных радикалов (молекул липидов и других веществ, содержащих неспаренные, свободные электроны) и их непосредственного, прямого взаимодействия с кислородом с образованием гидрофильных ацилгидроперекисей (липоперекисей). Совокупности их молекул в определенных местах мембраны образуют своеобразные «поры», через которые устремляются из органелл в цитоплазму ферменты — «убийцы» клеток, а компоненты цитоплазмы — в русло крови, обусловливая синдром цитолиза.
Этому способствует и снижение общей антиокислительной защиты мембран клеток тканей всего организма, в силу чего повышается проницаемость всех мембран клеток, в том числе тех органелл, в которых находятся, словно в заключении, «убийцы» клеток.
Более того, оказалось, что сопровождаемый снижением общей антиокислительной активности рост активности свободнорадикального окисления липидов приводит к большему образованию окисленных фосфолипидов — факторов значительной активации секреторной (мембранной) фосфолипазы А2, поскольку являются ее наилучшим субстратом. А значит в случае ослабления антиоксидантной защиты биологических структур возрастает вероятность возникновения и формирования тяжелых форм течения панкреатита.
Быстрый результат
Набор реагентов «ФЛА2-ФОА» предназначен для ранней дифференциальной диагностики тяжелых форм некротизирующего панкреатита на основе быстрого и эффективного определения методом фотометрического анализа в крови активности панкреатической фосфолипазы А2, увеличение активности которой является основным диагностическим признаком воспаления поджелудочной железы при панкреатите.
Показана и значимость определения при панкреатите общей антиокислительной активности сыворотки крови, снижение которой способно создать предпосылки к формированию этой формы мембранной патологии.
Выяснилось, что надежность диагностики острого панкреатита еще более возрастает при дополнении теста определения активности фосфолипазы А2исследованием общей антиокислительной активности (ОАА) с применением набора реагентов.
Уникальность метода определения ОАА состоит в использовании одного-единственного реагента, содержащего уже готовый, стабилизированный AВTS-радикал, что позволяет упростить процедуру анализа и делает возможным определение антиоксидантной активности как водо-, так жирорастворимых веществ, причем в течение весьма короткого промежутка времени с использованием отечественной фотометрической аппаратуры.
Набор реагентов подходит для исследования широкого спектра объектов: не только биологических жидкостей, но и экстрактов растительного и животного происхождения, напитков, синтетических фармсубстанций, пищевых продуктов.
Иные возможности теста
Сотрудниками кафедры клинической лабораторной диагностики и НИЛ БелМАПО в процессе выполнения работ по апробации новой методологии исследования показано, что исключение из хода анализа первого, предварительного этапа — прогревания анализируемой пробы сыворотки с целью предотвращения влияния на фосфолипазную активность иных термолабильных фосфолипаз, кроме термостабильной панкреатической, — открывает возможности для определения и общей секреторной активности ФЛА2, а следовательно, возможность использовать данный набор реагентов по новому назначению: для выявления воспалительно-деструктивных процессов, сопровождающих поражения различных органов и тканей.
Сферы применения новой методологии лабораторно-диагностического исследования общей антиокислительной активности биологических объектов далеко выходят за рамки ее использования при остром панкреатите. Они охватывают и другие области: онкологию — для определения антиоксидантного статуса пациента в ходе терапии и оценки эффективности применения антиоксидантных препаратов; кардиологию, терапию и хирургию — для выявления антиоксидантного дефицита у пациентов с различными формами соматической патологии и мониторинга антиоксидантной терапии; фармакологию — для оценки воздействия лекарственных препаратов на антиоксидантную систему организма; фармацевтическую промышленность — для установления антиоксидантного потенциала лекарств; пищевую промышленность — для быстрого измерения концентрации антиоксидантов в пищевых продуктах и напитках; а также косметологию и косметологическую промышленность, спорт высших достижений.
Установление снижения антиокислительной активности при ряде заболеваний внутренних органов явилось основанием к использованию антиоксидантов:
- при хронической ишемической болезни сердца;
- туберкулезе (вызывая к тому же устранение побочных реакций на антибактериальные препараты: стрептомицин и пр.);
- химиотерапии злокачественных опухолей;
- многих других заболеваниях, в частности при нарушении фертильных свойств эякулята (спермоплазмы) у мужчин репродуктивного возраста.
Не имеющие мировых аналогов отечественные тест-системы — «Набор реагентов для скрининга фитопрепаратов, биологических жидкостей и фармсубстанций на антиоксидантную активность «ОксиСтат» и «Набор реагентов «ФЛА2-ФОА» для определения активности панкреатической фосфолипазы А2 в крови человека методом фотометрического анализа» — явились результатом совместной междисциплинарной научно-практической деятельности специалистов разного профиля — химиков, биологов, врачей клинической лабораторной диагностики (и других) хозрасчетного опытного производства Института биоорганической химии НАН Беларуси, кафедры клинической лабораторной диагностики и научно-исследовательской лаборатории БелМАПО.