Клеточная иммунотерапия в настоящее время активно применяется в клинической практике, в частности при лечении онкологических заболеваний. Такой подход является дополнительным к традиционным методам лечения, позволяет снизить токсическое действие химиопрепаратов и повысить эффективность проводимой терапии. Для оказания медицинской помощи пациентам с использованием клеток создаются биомедицинские клеточные продукты (БМКП). Недавно в нашей стране был впервые зарегистрирован противоопухолевый биомедицинский клеточный продукт на основе естественных киллерных клеток человека. Технология разработана специалистами РНПЦ детской онкологии, гематологии и иммунологии.
Нормативная база при манипуляциях с клетками человека
Анжелика СолнцеваБиомедицинские клеточные продукты — это пересадочный материал, полученный на основе клеток человека, не подвергшихся существенным манипуляциям, за исключением эмбриональных, фетальных стволовых и половых клеток. Перечень манипуляций с клетками человека, не относящихся к существенным, устанавливается Минздравом. Такое определение БМКП дано в статье 18-3 Закона Республики Беларусь «О здравоохранении» от 18.06.1993 № 2435-XII (в ред. от 25.10.2023 № 308-З).
Для применения в клинике БМКП проходят государственную регистрацию, за исключением случаев, указанных в статье 39-3 Закона Республики Беларусь «О здравоохранении» (в ред. от 11.12.2020 № 94-З) и постановлении Совета министров Республики Беларусь «О вопросах государственной регистрации биомедицинских клеточных продуктов» от 28.11.2014 № 1120 (в ред. от 25.03.2022 № 175). Государственная регистрация осуществляется Министерством здравоохранения и является процедурой признания соответствия БМКП предъявляемым к ним требованиям по безопасности и качеству, допускает БМКП к производству, реализации и медицинскому применению.
На сегодняшний день в Государственном реестре зарегистрировано 14 БМКП, еще ряд готовятся к регистрации или проходят этап клинического испытания. Среди них БМКП на основе мезенхимальных стволовых клеток, дендритных клеток,
Т-лимфоцитов и др. Одним из ведущих учреждений Минздрава по разработке и изготовлению БМКП в республике является РНПЦ ДОГИ.
Прямое противоопухолевое действие
Созданный в РНПЦ ДОГИ БМКП «Клетки естественные киллерные человека» является первым в Республике Беларусь зарегистрированным клеточным продуктом с прямым противоопухолевым действием (регистрационное удостоверение № БМКП-7.116612 от 27.11.2024 г.).
Екатерина ВашкевичЕстественные киллерные (ЕК) клетки представляют собой популяцию лимфоцитов врожденного звена иммунитета, принимающих активное участие в формировании противоопухолевого и противовирусного иммунного ответа. Высокая цитотоксическая активность ЕК клеток в отношении малигнизированных клеток различного происхождения является основанием для использования данной группы лимфоцитов в адоптивной терапии онкологических заболеваний.
К настоящему времени накоплены положительные клинические результаты применения иммунотерапии аллогенными (донорскими) ЕК клетками при лечении острого миелоидного лейкоза в первой линии терапии, при рецидивах острых лейкозов, иммунотерапии после проведения аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток. Показана возможность использования аутологичных ЕК клеток при противоопухолевой терапии миеломной болезни и неходжкинских лимфом.
Положительные результаты получены при использовании ЕК-клеточной иммунотерапии для пациентов с солидными опухолями (рак яичников, молочной железы, желудка, кишечника, легких и др.).
При этом не описано развитиe жизнеугрожающих состояний и серьезных побочных явлений, связанных с введением ЕК клеток.
Наши собственные результаты в рамках пилотного клинического исследования иммунотерапии экспансированными ЕК клетками (ClinicalTrials.gov № NCT04327037) также продемонстрировали безопасность использования гаплоидентичных ЕК клеток у пациентов с рефрактерными и рецидивными формами острых лейкозов.
Мария НаумовичОдним из условий успешного применения ЕК клеток является получение достаточного большого количества клеточного продукта с необходимой чистотой и степенью активации популяции данных эффекторов. Для этих целей сегодня разрабатывается и исследуется ряд способов ex vivo экспансии ЕК клеток с использованием различных цитокинов или их комбинаций, моноклональных антител. Перспективным методом является применение фидерных клеток как вспомогательной платформы для поддержания роста лимфоцитов.
Запатентованный способ получения естественных киллерных клеток
Для получения БМКП «Клетки естественные киллерные человека» специалистами РНПЦ ДОГИ были созданы собственные генетически модифицированные фидерные клетки K-562, которые дополнительно несут на своей поверхности молекулы, необходимые для пролиферации и активации ЕК клеток.
По результатам доклинических исследований получен патент «Способ экспансии естественных киллерных клеток», с которым центр стал финалистом в конкурсе в сфере изобретательства «Лепшы патэнт Беларусi» в 2024 году.
Предлагаемый способ позволяет добиться значительного по сравнению с использованием только цитокинов прироста целевой популяции и таким образом увеличить дозу вводимых пациенту ЕК клеток для эффективного терапевтического применения. При использовании данной технологии получают конечный продукт с высоким содержанием ЕК клеток (более 90 %) без проведения дополнительной дорогостоящей процедуры изолирования ЕК методом магнитной сепарации, что существенно снижает стоимость БМКП и делает его более доступным для пациента.
Многоуровневый контроль качества
Каждый производимый БМКП проходит многоуровневый контроль качества, который включает:
- определение поверхностных антигенов, характеризующих популяцию ЕК клеток (CD56+, CD3-), методом проточной цитометрии;
- проведение контроля стерильности для исключения бактериальной контаминации культуры клеток;
- оценку генетической безопасности, критерием которой является отсутствие в БМКП примеси фидерных клеток (определяется по уровню экспрессии онкогена BCR-ABL методом ПЦР).
Сохранить готовый ЕК-клеточный продукт без значительной потери его функциональных свойств для последующего терапевтического применения возможно благодаря процедуре криоконсервирования и хранения при сверхнизких температурах.
Опыт применения естественных киллеров
Согласно инструкции по применению, БМКП «Клетки естественные киллерные человека» используется в комплексной терапии пациентов с острым миелоидным лейкозом, рецидивами и резистентными формами острых лейкозов. С 2019 года в РНПЦ ДОГИ проведена иммунотерапия с применением аллогенных ЕК клеток 28 пациентам.
В группе пациентов с первичным острым миелоидным лейкозом 3-летняя бессобытийная выживаемость составила 91 %, тогда как без применения иммунотерапии не более 80 %. Для пациентов с рефрактерными формами миелолейкоза введение ЕК клеток в 50 % случаев позволило достичь морфологической ремиссии и выполнить трансплантацию стволовых клеток. Ни в одном из наших наблюдений не было зафиксировано явлений токсичности и аллергических реакций. Таким образом, усиление стандартной химиотерапии применением ЕК клеток является перспективным методом лечения острого миелоидного лейкоза.
В настоящее время специалистами РНПЦ ДОГИ обсуждаются возможности использования ЕК клеток при других онкологических заболеваниях, в т. ч. у взрослых пациентов с перспективой экспортного потенциала этой технологии лечения.