Высокий статус РНПЦ детской онкологии, гематологии и иммунологии предполагает непрерывное динамичное развитие — разработку и внедрение самых передовых технологий. Как и в ведущих детских онкоцентрах мира, сегодня ставка делается на персонализированные методики с учетом генетических, иммунологических и молекулярных особенностей опухоли у конкретного пациента. Важную роль в этом процессе играет оснащение высокотехнологичным оборудованием. Недавно центр получил современную систему для капельной цифровой ПЦР, что открывает новые возможности в проведении молекулярно-генетических исследований. Об этом «Медвестнику» рассказала директор РНПЦ ДОГИ, доктор мед. наук, профессор Анжелика Солнцева.
Анжелика Викторовна, расскажите, пожалуйста, в чем особенность оборудования для капельной цифровой ПЦР? Чем эта технология отличается от ПЦР в режиме «реального времени»?
В нашем учреждении установлена система QX600 AutoDG Droplet Digital PCR System (Bio-Rad). Это одна из самых передовых платформ для молекулярной диагностики. Ее уникальность в том, что образцы биологических жидкостей (плазмы, мочи, спинномозговой жидкости) разделяются на тысячи нанокапель, и в каждой из них происходит независимая реакция амплификации. Такой подход позволяет абсолютно количественно определять даже единичные молекулы нуклеиновых кислот с чувствительностью до 0,1 %.
При традиционной ПЦР мы работаем с усредненными данными по образцу и редкие варианты могут оставаться незамеченными. Капельная цифровая ПЦР принципиально меняет ситуацию: каждую каплю мы оцениваем как положительную или отрицательную и подсчитываем их число по распределению Пуассона. Это обеспечивает беспрецедентную точность, возможность выявления клонов опухолевых клеток, мониторинга минимальной остаточной болезни и анализа циркулирующей опухолевой ДНК. Сегодня так называемая жидкостная биопсия становится неотъемлемым элементом молекулярной онкологии, открывая путь к малоинвазивной диагностике и динамическому контролю лечения.
Для каких задач система будет применяться в первую очередь?
В мировой практике жидкостная биопсия уже используется при лечении рака легкого, колоректального рака, опухолей мочевого пузыря. Однако в детской онкологии этот метод пока только начинает внедряться. Мы планируем использовать систему прежде всего для малоинвазивной диагностики в детской нейроонкологии.
Опухоли центральной нервной системы остаются ведущей причиной смертности у детей до 14 лет. Наиболее тяжелый прогноз имеют пациенты с диффузными срединными глиомами, летальность при которых чрезвычайно высока. Даже при глиомах низкой степени злокачественности локализация опухоли в стволе мозга существенно снижает показатели выживаемости.
Получение гистологического материала в таких случаях сопряжено с большими трудностями: биопсия несет высокий хирургический риск и требует значительных ресурсов — работы команды нейрохирургов, последующего ведения пациента, лечения осложнений и длительной реабилитации.
Цифровая капельная ПЦР позволяет обойти эти ограничения: мы получаем молекулярную характеристику опухоли из биологических жидкостей, можем уточнять диагноз, проводить дифференциальную диагностику и контролировать эффективность лечения без необходимости травматичных вмешательств.
Какие технические возможности вы считаете ключевыми?
Система оснащена автоматическим генератором, формирующим около 20 тысяч капель из каждой пробы. Ридер поддерживает мультиплексный анализ до шести флуоресцентных каналов. Это особенно важно для диагностики глиом, так как, согласно классификации ВОЗ 2021 года, выделение отдельных подтипов основано на выявлении специфических молекулярных альтераций. Таким образом, аппарат позволяет дифференцировать опухоли по их генетическому профилю, что напрямую связано с выбором оптимальной терапии.
Сегодня наблюдение за пациентами с опухолями центральной нервной системы в основном основано на методах визуализации, таких как МРТ. Однако увеличение размеров опухоли на снимках может быть связано не только с истинным прогрессированием, но и с так называемым псевдопрогрессированием — отеком или некрозом после лучевой терапии. В этом контексте определение циркулирующей опухолевой ДНК с помощью цифровой капельной ПЦР становится крайне актуальным. Этот метод дает возможность минимально инвазивно верифицировать диагноз, а сопоставление его результатов с данными МРТ и ПЭТ/КТ позволяет своевременно выявлять прогрессирование и принимать верные клинические решения. Мы уверены, что цифровая капельная ПЦР постепенно станет одним из важнейших инструментов в педиатрической онкологии.
Каковы перспективы применения этой технологии?
Горизонты применения чрезвычайно широки: от диагностики опухолей труднодоступных локализаций до мониторинга течения заболевания, раннего выявления рецидивов и подбора таргетной терапии. Учитывая быстрый технологический прогресс и растущий объем клинических исследований, определение внеклеточной циркулирующей ДНК методом цифровой капельной ПЦР будет все шире интегрироваться в лечение лиц с опухолевыми заболеваниями. Мы рассматриваем внедрение этой методики как важнейший шаг вперед в развитии персонализированной медицины в детской онкологии. Система позволит нам не только приблизить уровень диагностики к международным стандартам, но и инициировать новые исследовательские проекты в области онкологии и гематологии.
Анжелика Солнцева:
Оснащение РНПЦ детской онкологии, гематологии и иммунологии системой для цифровой ПЦР и сопутствующим оборудованием, необходимым для работы со свободно циркулирующими клетками, стало возможным благодаря поддержке Министерства здравоохранения и безвозмездной спонсорской помощи ОАО «Промагролизинг». От имени коллектива центра выражаю глубокую признательность за столь важный вклад, открывающий новые возможности диагностики и лечения наших пациентов.
РНПЦ детской онкологии, гематологии и иммунологии начал свою работу 13 октября 1997 года. Но традиционно день рождения центра отмечается 14 октября, в праздник Покрова Пресвятой Богородицы, что очень символично.
Ежегодно в центре получают медицинскую помощь около 7 тысяч пациентов, проводится порядка 45 тысяч консультаций.
Более 25 % хирургических вмешательств — сложные и высокотехнологичные. Выполняются все виды трансплантаций ГСК, в лечебно-диагностический процесс внедрены CAR-T-клеточная терапия, иммунотерапия, высокопроизводительное секвенирование. Наиболее значимые результаты достигнуты при лечении пациентов с острым лимфобластным лейкозом, лимфомами, ретинобластомой, нефробластомой (5-летняя выживаемость — более 90 %).