Первичные иммунодефициты (ПИД) — группа заболеваний, в основе которых лежат врожденные, генетически детерминированные, нарушения функций иммунной системы. На сегодняшний день описано 485 ПИД, за которые отвечают более 500 генов. В белорусском Республиканском регистре первичных иммунодефицитов представлено 750 пациентов (8:100 000 населения) с 66 различными ПИД, генетический диагноз подтвержден у 61 %, что значительно выше, чем во многих развитых странах мира. Большинство ПИД проявляется изменениями в качественном и/или количественном составе клеток иммунной системы, хотя при некоторых формах изменений в иммунограмме может и не быть. Современная дифференциальная диагностика ПИД в значительной степени связана с возможностью эффективного применения проточнойцитометрии.
Проточная цитометрия
Анжелика СолнцеваАнализаторы для исследования клеток методом проточной цитометрии (проточные цитометры) позволяют проводить обладающие высокой чувствительностью и специфичностью исследования в клинической практике, быстро и надежно анализировать множество характеристик отдельных клеток внутри разнообразных клеточных популяций. Метод играет важную роль в количественной и качественной оценке клеточных популяций в биологических образцах и образцах клеточных линий, в том числе входящих в состав биомедицинских клеточных продуктов.
Михаил БелевцевПрименение проточных цитометров нового поколения в РНПЦ ДОГИ значительно повышает качество выполнения иммунофенотипических исследований для диагностики онкогематологической патологии, в частности острых и хронических лейкозов, миелодиспластического синдрома, лимфом, врожденных нарушений иммунитета, соматической онкологии (нейробластома, саркомы), оценки качества трансплантата, определения стволовых клеток крови, мезенхимальных стволовых клеток из различных тканей.
Исследования минорных (малых) популяций иммунокомпетентных клеток методом проточной цитометрии играют важную роль в дифференциальной диагностике ПИД. Так, изучение переключенных В-клеток памяти является решающим в диагностике общего вариабельного иммунодефицита, а определение клеток-эмигрантов из тимуса характеризует степень тяжести многих синдромов.
С использованием проточной цитометрии возможно определение не только основных популяций лимфоцитов (Т-лимфоциты, В-лимфоциты и естественные киллерные клетки) и минорных субпопуляций, но и изучение их функции (работа ферментов, синтез цитокинов, пролиферация, активация), а также исследование работы генов, ответственных за формирование ПИД, посредством выявления экспрессии соответствующих белков. Например, для диагностики хронической гранулематозной болезни необходим тест по исследованию кислородообразующей функции гранулоцитов с применением проточной цитометрии.
Тяжелый комбинированный иммунодефицит (ТКИН)
Патология характеризуется нарушением дифференцировки целого звена иммунитета (Т-лимфоцитов, В-лимфоцитов и естественных киллеров). В Республиканском регистре первичных иммунодефицитов пациенты с ТКИН составляют чуть более 6 % всех пациентов с ПИД.
Основной особенностью всех тяжелых комбинированных иммунодефицитов при иммунологическом исследовании является резкое снижение или полное отсутствие Т-лимфоцитов, как Т-хелперных клеток, так и цитотоксических Т-лимфоцитов.
Дополнительным, но не менее важным критерием считается уменьшение субпопуляции Т-клеток-эмигрантов из тимуса, что указывает на выраженное нарушение функции этого органа. Пациенты с ТКИН делятся на две группы в зависимости от наличия или отсутствия В-лимфоцитов. При отсутствии В-лимфоцитов, соответственно, нет основных иммуноглобулинов классов IgG, IgM, IgA. Ведущим методом лечения данной патологии является трансплантация гемопоэтических стволовых клеток, которая позволяет в течение года восстановить основные субпопуляции Т-лимфоцитов и В-лимфоцитов за счет донорских клеток.
Дефекты антителообразования
Группа ПИД с преимущественным дефектом антителообразования представлена Х-сцепленной агаммаглобулинемией, аутосомно-рецессивной агаммаглобулинемией, общим вариабельным иммунодефицитом, селективным дефицитом IgA, синдромом гипер-IgM и некоторыми другими редко встречающимися ПИД. В Республиканском регистре первичных иммунодефицитов пациенты с этой патологией составляют более 31 %.
При агаммаглобулинемии основным диагностическим критерием является отсутствие В-лимфоцитов, при этом число Т-лимфоцитов и естественных киллерных клеток у большинства пациентов в пределах нормы как в относительном содержании, так и в абсолютных числах, рассчитанных от числа лимфоцитов.
Полное отсутствие В-лимфоцитов влечет за собой дефицит плазматических клеток, синтезирующих иммуноглобулины.
Общая вариабельная иммунная недостаточность (ОВИН)
Особую роль играют исследования клеток иммунной системы у пациентов с ОВИН. В настоящее время клинические иммунологи рассматривают данное заболевание как основной ПИД у взрослых, причем число выявленных пациентов практически равняется числу лиц со всеми другими первичными иммунодефицитами, за исключением селективного дефицита иммуноглобулина А.
Клинически ОВИН очень многообразен. Но есть общий характерный иммунологический критерий — это резкое снижение или практически полное отсутствие В-клеток памяти при нормальных значениях общих Т-популяций и В-популяций лимфоцитов.
В-клетки памяти представляют минорную популяцию долгоживущих В-лимфоцитов, которая также разделяется на несколько еще меньших субпопуляций в зависимости от экспрессии определенного класса иммуноглобулинов и отвечает за долгое сохранение «иммунологической памяти».
Комбинированные иммунодефициты
Одной из многообразных групп ПИД является группа комбинированных иммунодефицитов с точно установленными синдромами (синдром Вискотта — Олдрича, синдром Ниймеген, синдром Луи-Бар и другие). Эта группа, по данным регистра, составляет около 26 % всех диагностированных случаев. Для этих ПИД нет четких критериев, связанных с обязательным изменением в субпопуляционном составе лимфоцитов. Отмечается дисбаланс в составе субпопуляций Т-лимфоцитов со снижением числа Т-клеток-эмигрантов из тимуса, уменьшается число В-клеток памяти. Однако данные изменения могут носить промежуточный характер и не являются обязательными критериями диагностики. Методом проточной цитометрии можно определить уровень внутриклеточного белка WASP, который служит важным диагностическим критерием для постановки диагноза синдрома Вискотта — Олдрича при неясной патогенности выявленных генетических нарушений в гене WAS.
Группа ПИД с проявлениями иммунной дисрегуляции
Интересной и сложной в диагностике является группа первичных иммунодефицитов с проявлениями иммунной дисрегуляции. В Республиканском регистре ПИД представлено 57 пациентов, что составляет 7,6 % от общего числа диагностированных.
Ведущая патология в данной группе — аутоиммунный лимфопролиферативный синдром (АЛПС), характерным клиническим признаком которого является хроническая незлокачественная лимфопролиферация.
К обязательным диагностическим критериям относят определение дважды негативных Т-лимфоцитов (минорная субпопуляция Т-лимфоцитов ранней дифференцировки, не несущая на своей поверхности ни маркеров Т-хелперных клеток, ни маркеров цитотоксических Т-лимфоцитов). В норме таких клеток до 1 %, тогда как при АЛПС их количество может увеличиваться до 10 % и даже до 15 %. Диагностическим критерием в данной группе является определение регуляторных Т-лимфоцитов (минорная популяция Т-лимфоцитов, необходимая для физиологической иммуносупрессии). В зависимости от содержания Т-регуляторных клеток определенные заболевания из этой группы относят к так называемым Т-регулопатиям, что позволяет прогнозировать раннее возникновение аутоиммунных осложнений.
Дефекты фагоцитарных клеток
Существует группа ПИД, связанная с врожденным дефектом числа и функции фагоцитирующих клеток, в основном нейтрофилов. У данной группы пациентов определение стандартного распределения субпопуляций лимфоцитов не имеет диагностического значения. При этом золотым стандартом диагностики также является метод проточной цитометрии, в основе которого лежит определение молекул свободного кислорода, выделяющихся в ответ на активацию фагоцитоза при работе катализатора НАДФ-оксидазы.
Вывод
Таким образом, возможность эффективного применения проточной цитометрии позволяет проанализировать и оценить иммунологические диагностические критерии ПИД и является важной составляющей при проведении дифференциальной диагностики первичных иммунодефицитов.